Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1改进型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失口内自身抗锥体到消失1改型心血管疾病流行病学呕吐的成效率在成人时期就有很差的说明了，多个口内自身抗锥体特征性的成人此前有70%在血清转换后10短期内患上心血管疾病，而随访15年的成人这一人口比例减少到84%。来得之下，分之二流行病学1改型心血管疾病一半以上的改型1改型心血管疾病的胃癌机制还未获得充分的深入研究。

越来越多的人开始用于分阶段系统会来并不一定1改型心血管疾病的成效：个锥体在消失多种口内自身抗锥体时进入第1阶段性，消失低血糖异常时进入第2阶段性，消失呕吐时进入第3阶段性。一些多发口内自身抗锥体特征性的个锥体，在1期和2期，成效较更加慢，并发展为胃癌的1改型心血管疾病。我们此前说明了了一第组合成在首次核对到多种口内自身抗锥体结果标示出后至少10年无心血管疾病的却是更加慢成效者，这第组合成高血压多人少，但外观上颇为一致。随后，我们推断出口内自身专一性专一性CD8+T细胞内反应会在成效加速的高血压此前基本不依赖于，但在近期胃癌和或多或少的心血管疾病高血压此前很易于核对到。这有可能指出，与成效高血压来得，这些高血压自身专一性会的闭环增强。

早期深入研究指出，尽管闭环性T细胞内(Treg)人口比例但会，但心血管疾病高血压依赖于一些功能缺陷，其此前包括对IL-2的反应会意志力降低。此外，心血管疾病高血压此前的不稳定性CD4+T细胞内有可能对闭环更加具抵抗性，表现为不稳定性T细胞内的抑制作用减慢，其本质转化成的Treg和锥活体转化成的诱导Treg，以及专一性经历的CD4+T细胞内此前IL-2反应会减慢。本深入研究的旨在是说明了了CD4+闭环性T细胞内(Treg)在一小群却是加速成效者此前的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以这群人蓝本的纵向深入研究，在21岁以下出院的高血压亲属此前核对1改型心血管疾病的可怕原因。我们此前说明了了长期加速成效者的外观上，他们保证多重口内自身抗锥体特征性超过10年，但未消失心血管疾病的流行病学呕吐，更加慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保证无心血管疾病并不想提供大量血液结果标示出的加速成效者纳入T和B细胞内功能分析方法。在目前的深入研究此前，8名更加慢成效者(SP第组合成)，此前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗锥体特征性。所有的自发性都处于1改型心血管疾病成效的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗锥体对某些专一性的施打会，然而，一名高血压从未处于2期至少6年，但未消失流行病学呕吐，一名高血压被病症为心血管疾病，该受试者72岁，在采集实验结果标示出时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法此前对该NAD展开了直接评核。分开外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内精和T细胞内抑制作用次测试评核NAD此前Treg的基频、表改型和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类核对、表征和复出)展开无委派聚类分析方法，评核Treg表改型。

结果：与生活着品质NAD来得，来自更加慢成效锥体的失忆CD4+T细胞内的委派聚类标示出，作用于着的失忆CD4+ Treg基频减少，与糖皮质激素诱导的TNFR相关受体(GITR)暗示减少有关。一名HbA1c升高的高血压与成效加速者和匹配的对照第组合成来得，Treg谱有所不同。功能分析方法指出，与生活着品质NAD来得，来自加速成效锥体的Treg酪氨酸的CD4+不稳定性T细胞内抑制作用微小损坏。表现为对不稳定性CD4+T细胞内CD25和CD134暗示的抑制作用减少。

左图1 深入的表改型分析方法标示出，CD4+Treg亚改型在更加慢成效路由表此前减少。由FlowSOM分解成的Treg二楼，聚集在来自所有NAD的活着CD4+CD45RA -细胞内上。根据上面物暗示核对出10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用于9个不同Treg上面分解成的10个元簇的MST。每个端口代表一个一个大(100个一个大)，更加大的元一个大(10个元一个大)在端口第组合成周围上色。每个端口此前的甜品左图说明单个上面的暗示层次。(b)每个元聚类的热左图，以标示出整锥体上面暗示。(c, d)为HD第组合成(c)和SP第组合成(d)分解成左图，以及FlowSOM定位的每个元簇的大块。(e-l)相比数量级为每个metacluster箱本站左图(数量级> 0.05%)确定为HD和SP第组合成:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。深深蓝色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的预测模改型证实，Treg基频的减少是成效加速的标志。分级依赖型(a - f)和玉米分析方法(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个锥体的近现代左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示展开分开，模拟FlowSOM个锥体。(b) HD(黑点)和SP(白点)第组合成以及NADSP 606(深深蓝色)此前CD25+ cd127的基频汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型有界的箱本站左图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD路由表之间的不同。(j)箱本站左图标示出了在SP(白点)和HD(灰点)第组合成此前，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比数量级(人口比例)。(k)直方左图标示出每个簇的表改型(粉红色)和Treg上面相比暗示与文化背景暗示(深蓝色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。文化背景与所有其他簇此前上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩验

左图3 与生活着品质献血者来得，成效加速者失忆treg的GITR减少。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)核对每个暗示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的暗示热左图(sp606不包括在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇此前所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，标示出直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon一组符号秩和验，p< 0.07(深深蓝色)所有NAD包括，p< 0.05(深蓝色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试此前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs此前GITR暗示，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(深深蓝色)串联，标示出直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩验

左图4 来自加速成效的CD4+ treg细胞内支配不稳定性CD4+T细胞内的意志力降低。SP第组合成用深蓝色的本站和左上方说明，HD第组合成用黑色的本站和左上方说明，深深蓝色的本站/左上方说明NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培育出3天内展开流式细胞内精核对。(a-d)与CD4+；也者相比应的treg培育出(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。用于特征性对照(作用于着的响应细胞内不含treg)计算抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 不稳定性CD4+T细胞内对加速成效的T细胞内诱导的抑制作用更加敏感。SP第组合成用深蓝色的本站和左上方说明，HD第组合成用黑色的本站和左上方说明，深深蓝色的本站/左上方说明NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按观察的人口比例高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培育出3天内展开流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同完成培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出此前的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自加速成效子的诱导失忆CD4+Treg在GITR暗示此前获得了拓展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1改型心血管疾病风险个锥体此前的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28